細胞培養(yǎng)中的那些問題
更新更新時間：2021-11-19
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細胞培養(yǎng)中的那些問題
上海連橋生物科技有限公司
做細胞培養(yǎng)的同學(xué)如果互相交流會發(fā)現(xiàn)，不同的實驗室有些規(guī)則是不一樣的，初學(xué)者經(jīng)常不知對錯，小編今天就和大家總結(jié)一下這些問題，希望對你的細胞之路有所幫助。
購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？
研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中 細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時 除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞） DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？ 冷凍保存使用之DMSO等級，必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即為無菌狀況，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于4 C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？ 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，造成細胞無法存活。 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？ 不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素 除于特殊篩選系統(tǒng)中外 細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何 動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之 細胞欲冷凍保存時 冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial，融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜 L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎 L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的 GlutaMAX-I是什么 GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn) 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因 為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統(tǒng) 本篇轉(zhuǎn)載至實驗之家
