過柱方法和技巧
更新更新時(shí)間：2021-10-25
瀏覽次數(shù)：4138
過柱方法和技巧
上海連橋生物科技有限公司
一：柱子可以：加壓
，常壓
，減壓
壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間
，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)
。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱，但是時(shí)間也最長，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量
，感覺能夠節(jié)省一半甚至多，但是由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對它有比較深厚的感情 ，但是自從嘗試了加壓后
，就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了。
加壓柱是一種比較好的方法
，與常壓柱類似
，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣
，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）
。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大
，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果
。個(gè)人覺得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。
二：關(guān)于柱子的尺寸
應(yīng)該是粗長的最好
。柱子長了
，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了
，上樣后樣品的原點(diǎn)就?div id="m50uktp" class="box-center"> 。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^薄）
，這樣相對的減小了分離的難度
。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米
，那么分離的難度可想而知
，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到*分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）。
現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍
，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。三：關(guān)于無水無氧柱
適用于對氧
，水敏感，易分解的產(chǎn)品，可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加壓、常壓、減壓，隨需而定 。因?yàn)槭莝chlenk操作
，所以點(diǎn)板是個(gè)問題，如果樣品是顯色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色，只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以前過一根無水無氧柱，需要六個(gè)schlenk，現(xiàn)在只一個(gè)就能把所要的全收集到。
無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因?yàn)楣枘z中有大量的羥基裸露在外
，很容易是樣品分解，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。聽說有個(gè)方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗(yàn)證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。四：關(guān)于濕法
、干法上樣濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品
，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?div id="jfovm50" class="index-wrap">？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對樣品的吸附飽和
，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶
，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分
，如果不能重結(jié)晶，那就不管它了
，直接過就是了
，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。
有些樣品溶解性差
，能溶解的溶劑又不能上柱（比DMF,DMSO等
，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長的脫尾）
，這時(shí)就必須用干法上柱了
。樣品和硅膠的量有一種說法是1：1
，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。
五：溶劑的選擇
當(dāng)然是便宜
，安全，環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它不可。乙mi也可以用，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡
，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些
。甲醇據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神
，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理
，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對較少
，要依個(gè)人的不同需要選擇了
。
由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛）
，我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的
，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)
，其他的雜質(zhì)就可想而知了
，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對溶劑重蒸。當(dāng)然過原料時(shí)就可以免去這一步了
，反正下面還有提純的方法
。
另外溶劑在過柱子后最好也回收使用
，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)
，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工
。這里要注意的是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸
，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)性的變化
，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適
，正好極性越來越大了
。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓
，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來
，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了
。
六：關(guān)于操作問題
1
、 裝柱
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的
，可以采用四氟節(jié)門的
。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行
。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢）
，一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡
，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響
，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了
。但是柱子更忌諱的是開裂
，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果
，甚至作廢
！
2、 加樣
用少量的溶劑溶樣品加樣
，加完后將下面的活塞打開
，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑
，然后再打開活塞
，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了
。加入淋洗劑
，一開始不要加壓
，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓
，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行
。
3、 淋洗劑的選擇
感覺上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好
。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開
，過柱子就用那種極性，如果rf在0.6
，即使相差0.2也不容易在柱子上分開
，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度
，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大
4、 樣品的收集
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡
。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話
，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生
，后面的點(diǎn)先出
，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相
。另外
，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品
，如果用大試管
，可能一根就收到了三個(gè)樣品，wuwu
。如果都用小試管那工作量又太大
。
5、最后的處理
柱分后的產(chǎn)品
，由于使用了大量的溶劑
，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以如果想送分析
，最好用少量的溶劑洗滌一下
，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒了
，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶
。
另外，再過柱的時(shí)候
，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡
，一是和使用的溶劑有關(guān)
，如果是易揮發(fā)的溶劑，如
、二氯甲烷等
，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象
，因此
，在室溫高的時(shí)候，可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對小的溶劑。還有，使用混合溶劑時(shí)，使用的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90)
本篇轉(zhuǎn)載至實(shí)驗(yàn)之家
