液相色譜柱的使用誤區(qū)
更新更新時間：2021-09-16
瀏覽次數：2716
液相色譜柱的使用誤區(qū)
上海連橋生物科技有限公司
誤區(qū)：空氣會*毀滅一根HPLC色譜柱?
當色譜柱不與色譜儀連接的時候
誤區(qū)：保護柱是沒必要的
使用保護柱有很多好處。首先
誤區(qū)：所有的C18（L1）色譜柱都是一樣的
美國藥典委員會（USP）開發(fā)了一種分類系統(tǒng)，用來對每種類型的鍵合相柱進行分類
某些色譜柱生產商使用二氯硅烷和三氯硅烷作鍵合試劑，將鍵合相聚合反應形成一很厚的具有不同擴散特性的疏水層
硅醇基是在中性條件下測定堿性物質時導致色譜峰拖尾的原因之一
另外有些生產商采用聚合物基體材料進行C18鍵合
，生產出一種*不同的C18填料，但仍然被歸類到“L1"。還有廠家采用反應性能不同的硅烷化試劑，制造出一種與氯硅烷反應產生的不同的C18固定相。??誤區(qū)：反相色譜柱不可以使用純水相?
這個誤解其實是起源于有些用戶在使用低有機溶劑含量或者純水作為反相色譜柱的流動相時
，發(fā)生了俗稱相塌陷的現象，所以大家就認為反相色譜柱不可以使用純水相。??許多色譜工作者都被相塌陷現象和保留時間位移現象困擾著
，甚至已經失去了努力尋找解決途徑的耐心。因此，他們索性就認為不應該在反相色譜柱中運行水含量很高的流動相。然而
，事實上市售的反相色譜柱（如極性嵌入和極性封端柱）都是具有水浸潤性的，其表面特性是允許使用純水的，而不會導致塌陷或者保留時間移位。?比如科思美析COSMOSIL的C18-PAQ系列則可以使用100%水作為流動相，適合分離親水型化合物，并相較于傳統(tǒng)的十八烷基鍵合硅膠色譜柱，具有很強的抗酸性。??誤區(qū)：不可以將HPLC色譜柱反接以便于沖洗掉其中的顆粒物?
實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多（通常會高2倍）
液相色譜柱上基本都有→標志，表示流動相的流動方向
一
二
、色譜柱使用一段時間后柱效下降，此時可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填滿，然后用流動相反沖一下，可使柱效恢復，因反沖可以改善柱頭死空間。??三
、因反沖可把沉積在過渡板上的細微顆粒沖走，有時也可用反沖技術使柱壓降低。??反向使用色譜柱有一個例外
，就是生產商在色譜柱的進樣端使用了孔徑更大篩板的情況，反向使用可能會將填料從柱床沖出。如果制造商在柱的入口處使用的是高孔隙率的玻璃料，那么將柱反沖的話，可能會將柱填料從填充床上沖洗掉。??色譜柱在工廠填裝時
，出口端的篩板孔徑必須比色譜柱中最小顆粒的粒徑還要小。譬如，色譜填料平均粒徑是5μm，粒徑分布范圍是3-7μm，出口端篩板孔徑必須小于3μm，使填料沒有可能從柱床跑到色譜柱篩板外面。??大多數生產廠家選擇的篩板孔徑是2μm
。至于某些廠家兩端的柱篩板孔徑不一樣，一般是進樣端大些，出樣端小些。因此，一些制造商會在柱子標簽處放置一個箭頭指示，表明必須僅在一個方向上使用?div id="jfovm50" class="index-wrap">？梢钥隙ㄓ羞@種可能性，所以一個色譜工作者應該好好閱讀色譜柱手冊或說明書誤區(qū)：色譜柱填料粒徑越小、壓力越高
超小的粒徑以及超高的柱壓
本篇轉載至實驗之家
