酶標儀的選擇
更新更新時間：2022-06-17
瀏覽次數(shù)：1758
酶標儀的選擇
上海連橋生物科技有限公司
一 多功能酶標儀的分類方法眾多，但zui簡單的莫過于用他們的濾光方式來作分界線 總體來說，濾片技術(shù)由于發(fā)展已久，配合二向色鏡(其實也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路系統(tǒng)，可以實現(xiàn)大部分實驗的需要。目前常規(guī)多功能酶標儀中高的檢測靈敏度就是用濾光片型做出來的，例如TECAN Infinite F500的熒光檢測的靈敏度可以達到0.04 fmol/孔(熒光素，384孔/80ul)。 但是濾光片型儀器由于受限于濾片的波長和數(shù)量限制，不可能滿足日益增加的實驗類型的檢測需要，而且有時需要對物質(zhì)的吸收、激發(fā)和發(fā)射光譜進行研究，所以后來就誕生了光柵型的儀器。 最先推出光柵的是MD公司，其光柵習慣上稱為單光柵。由于光純度的不足，在光柵的后面又加入了一組帶阻濾片，再把雜光過濾一遍，達到了5×10-4的雜光率，基本與純粹的濾光片系統(tǒng)一致。后來TECAN又發(fā)展出了雙光柵技術(shù)，通過兩次光柵濾光，雜光率降到了10-6。后來，Thermo 光柵型酶標儀的推陳出新 二、雜光率&波長準確性 光柵型濾光系統(tǒng)儼然已經(jīng)成為了目前通用性多功能酶標儀的主流，多家廠家共同努力，已經(jīng)把光柵技術(shù)推到了歷史新高。在光柵的眾多技術(shù)參數(shù)之中，最關(guān)鍵的無疑就是光柵的雜光率和波長選擇的準確性了。 雜光率指得就是光源通過光柵后，得到的光線中，“不需要”的波長的光占所標稱波長的光的比例，表征了濾光的純度。由于光線干涉、衍射等的復雜性，無論使用濾光片還是光柵，雜光都是不可避免的。各種濾光技術(shù)的本質(zhì)就是要想辦法把雜光盡可能地去掉。一般來說，濾光片型的雜光率在10-4～10-5之間，光柵型的可以做到10-6～10-7。由于此類雜光是非特異的，而且會直接進入最后的檢測器，所以有多少的雜光就會引入多少的隨機誤差。在熒光等檢測過程中，由于檢測器存在放大效應(yīng)，雜光率的干擾也會被指數(shù)級放大。因此，雜光率就是一個濾光系統(tǒng)的首要性能指標。 光柵的另一個重要指標就是波長選擇的準確性。因為很多檢測是依賴于物質(zhì)在某個波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定，實際檢測波長偏離260nm幾個nm以上的話，OD值與最終濃度之間的數(shù)學關(guān)系就會發(fā)生改變。因此，一組性能優(yōu)良的光柵系統(tǒng) 這兩個可謂是光柵甚至濾光片濾光系統(tǒng)最關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù) 三 在保證檢測可靠的基礎(chǔ)上 靈敏度涉及了整個光路系統(tǒng)的設(shè)計和選料 各單項檢測的*結(jié)果都是用相應(yīng)檢測器完成的。當然也有的儀器出于成本等考慮，用一個檢測器兼容多種檢測模式，這在一定程度上也能完成實驗需求，但是在性能上也會有所犧牲折中，無法實現(xiàn)各項檢測都達到*化。 關(guān)于靈敏度的定義和檢測標準，每個廠家都有各自的描述，都會說自己是怎樣怎樣好，很難有一個直觀的客觀比較。因此，某些試劑廠家就站了出來，對某些儀器的檢測性能提供一個第三方的認證。 比較常見的是發(fā)光檢測領(lǐng)域里面的Promega公司DLReady認證，熒光檢測領(lǐng)域的Invitrogen公司的LanthaScreen系列認證、Cisbio公司的HTRF認證、BellBrook實驗室的Transcreener認證等等。這些認證主要是針對公司提供的某一類型的要求較高的試劑盒，涵蓋了對檢測儀器的各種性能要求 如果需要做相關(guān)的實驗 需要特別注意的是 光柵型的儀器由于新技術(shù)近幾年才逐漸興起 這說明了光柵型酶標儀的研發(fā)又進入了一個新的高度 四、比色杯+微量檢測 除了常規(guī)的6～384/1536孔酶標板檢測之外，有些儀器還附帶了比色杯 本篇文章轉(zhuǎn)至實驗之家
