避免RNA降解的注意事項(xiàng)
更新更新時(shí)間：2022-09-16
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上海連橋生物科技有限公司
避免RNA降解的注意事項(xiàng)
1. 使用正確的細(xì)胞或組織儲(chǔ)存條件
在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后 2. 消除環(huán)境 RNase 的污染 為了得到完整的、高品質(zhì) RNA 3. 迅速滅活內(nèi)源的 RNA 酶 以下 3 個(gè)方法均可有效使內(nèi)源 RNA 酶失活： 1）用含離液（如胍鹽）的細(xì)胞裂解液收獲樣品 2）用液氮瞬間凍結(jié)樣品 就能凍結(jié) 3）立即將樣品置于 RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲(chǔ)存液中 能立即穩(wěn)定并保護(hù)完整、未凍結(jié)的組織和細(xì)胞樣品中的 RNA。關(guān)鍵要點(diǎn)是組織樣品切片一定要夠?div id="4qifd00" class="flower right"> 4.選擇合適破壁方法 細(xì)胞或組織的*勻漿對(duì) RNA 提取來(lái)說(shuō)，是一個(gè)很關(guān)鍵的步驟，它能夠防止 RNA 的損失和降解。勻漿的方法應(yīng)根據(jù)細(xì)胞或組織的類型來(lái)選擇。大部分培養(yǎng)的細(xì)胞可以置于細(xì)胞裂解液中，通過(guò)簡(jiǎn)單的渦旋震蕩來(lái)勻漿；而動(dòng)物組織、植物組織、酵母和細(xì)菌 5.選擇最適 RNA 提取試劑（盒） 現(xiàn)有眾多的 RNA 分離方法也許令人難以取舍 對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞，組織 6. 低濃度 RNA 的沉淀 純化得到的 RNA 可能需要通過(guò)沉淀來(lái)濃縮，以滿足一些下游應(yīng)用的需要。醋酸銨(NH4OAc) 沉淀（加 0.1 體積的 5M 醋酸銨、2-2.5 體積的無(wú)水乙醇，-20°C 放置 25 分鐘以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低濃度的RNA（ng/ml），可以采用共沉淀（如 linear acrylamide 糖原 glycogen,酵母 yeast RNA）的方法。核酸助沉劑是 linear acrylamide，當(dāng)RNA 用于 RT-PCR 分析時(shí)，線性的丙烯酰胺和 DNase 處理的糖原都可以作為理想的共沉淀劑，因?yàn)樗鼈兌疾缓?DNA 污染，糖原含量高會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)，應(yīng)注意控制濃度，核酸助沉劑對(duì) PCR 無(wú)影響，成為病毒核酸提取的**。酵母 RNA 和未處理的糖原會(huì)給樣品帶來(lái)核酸污染，有可能影響 RT-PCR 的結(jié)果。沉淀后，注意避免 RNA 沉淀過(guò)分干燥，因?yàn)檫@可能導(dǎo)致很難重新溶解。 7.提取好的 RNA 如何儲(chǔ)存 RNA 最好是提取完成后，立刻進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。如果只是短期儲(chǔ)存
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