菲羅門色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)
更新更新時間：2022-05-19
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菲羅門色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要
，稍有不慎就會降低柱效
、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中
，需要注意下列問題
，以維護(hù)色譜柱。
1
、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動
。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料
，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行
，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩(如前所述)。
2
、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成
，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?div id="m50uktp" class="box-center"> ，反之亦然?br />
3
、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時
，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效
。
4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)
，以避免固定相被破壞
。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時
，預(yù)柱為硅膠
，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解
。
5、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱
，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)
。在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡
，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
6、保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
7、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)
，使柱頭被污染
；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷
，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時
，小心擰開柱接頭
，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱
，壓平
，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善
，但是很難恢復(fù)到新柱的水平
。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm)
，可以起到保護(hù)
、延長柱壽命的作用
。采用保護(hù)柱會損失一定的柱效
，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上
。以硅膠為基質(zhì)的填料
，只能在pH2-9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?br />
8、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。每次工作完后，最好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4-5天開機(jī)沖洗15分鐘。
