液相色譜不能這么用/液相色譜錯誤使用方法盤點
更新更新時間：2021-08-09
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液相色譜不能這么用/液相色譜錯誤使用方法盤點
上海連橋生物科技有限公司
液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了
，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會習慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導致一些儀器故障有時候為了求快會忽略一些步驟
1. 流動相不過濾
因為塵?div id="m50uktp" class="box-center"> ；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞
2. 使用后沒有及時清洗泵
流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)
，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充分清洗后
，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。3. 流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完
，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，終產(chǎn)生漏液。4. 沒有流動相流出
，又無壓力指示可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥
，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。5. 壓力和流量不穩(wěn)
原因可能是氣泡
，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥6. 壓力為啥過高或過低
可能是是管路被堵塞
，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進行。在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合
，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：PS：（在液相色譜中對組分復雜的樣品采用梯度洗脫的方法
。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。7. 梯度洗脫的流動相選擇不當
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相
。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時
，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。8. 忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高
，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣
9. 忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化
10. 關(guān)于六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾
②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中
11. 關(guān)于色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要
，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。12. 調(diào)節(jié)流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動
。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。13. 反沖色譜柱
一般說來色譜柱不能反沖
，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效14. 預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH）
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)
15. 液相色譜在使用過程中四大關(guān)鍵因素
① 液相色譜儀本身：
對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器
② 色譜條件：
色譜條件一般包括流動相
流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別
色譜柱會因不同的品種而有不同的要求
流速也因品種的不同而不同
③ 操作人員：
首先，作為液相操作人員
一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴格按照操作要求進行操作
其次
④ 液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠離振動
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